2023年8月，真邁生物用戶(hù)俄羅斯科學(xué)院托木斯克國(guó)家研究醫(yī)學(xué)中心癌癥研究所的Anastasia Frolova博士在國(guó)際刊物Bulletin of Experimental Biology and Medicine在線發(fā)表題為“Preparation of a Single-Cell Suspension from Tumor Biopsy Samples for Single-Cell RNA Sequencing”的研究成果，該研究團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)了多種腫瘤活檢標(biāo)本的解離方法，均成功制備了高于80%活力的細(xì)胞懸浮液，通過(guò)GenoLab M測(cè)序儀進(jìn)行scRNA-seq后，最終確定了樣品制備的最佳方式為：機(jī)械解離后，添加DNAase I的膠原酶/透明質(zhì)酸酶混合物一起孵育60分鐘。該研究?jī)?yōu)化了腫瘤活檢組織制備單細(xì)胞懸浮液以進(jìn)行單細(xì)胞RNA測(cè)序的方法。

腫瘤具有顯著的細(xì)胞異質(zhì)性，涉及到多種細(xì)胞類(lèi)型，了解其細(xì)胞間相互作用對(duì)疾病治療至關(guān)重要。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(scRNA-seq)是在單個(gè)細(xì)胞水平進(jìn)行高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的一項(xiàng)新技術(shù)，能夠有效解決細(xì)胞異質(zhì)性以及組織轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（bulk RNA-seq）被掩蓋的細(xì)胞群內(nèi)轉(zhuǎn)錄組異質(zhì)性難題。近年來(lái)，scRNA-seq提供了研究腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性和基因表達(dá)的新視角，但只有制備出高質(zhì)量的單細(xì)胞懸浮液樣本，才能開(kāi)展scRNA-seq研究。

該研究?jī)?yōu)化腫瘤活檢樣本制備單細(xì)胞懸浮液的方法。他們通過(guò)機(jī)械離解和酶解離的組合，特別是機(jī)械離解結(jié)合膠原酶/透明質(zhì)酸酶混合物的使用，最終獲得了至少80%存活率的單細(xì)胞懸浮液。在獲得的懸浮液樣本中，進(jìn)行了scRNA-seq分析，成功鑒定了不同細(xì)胞類(lèi)型，包括腫瘤細(xì)胞、單核細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞。圖1是詳細(xì)的scRNA-seq測(cè)序流程，從獲得腫瘤活檢組織開(kāi)始到scRNA-seq測(cè)序獲得不同的細(xì)胞亞群的全過(guò)程。

該研究為scRNA-seq提供了可靠的樣本制備方法，能夠獲得高質(zhì)量、高存活率的單細(xì)胞懸浮液。這種方法的成功為未來(lái)腫瘤生物學(xué)研究提供了重要工具，有望幫助科學(xué)家更全面地理解腫瘤細(xì)胞之間的交互作用和基因表達(dá)差異，為個(gè)性化醫(yī)療和腫瘤治療策略的設(shè)定提供支持。

Frolova A A, Gerashchenko T S, Patysheva M R, et al. Preparation of a Single-Cell Suspension from Tumor Biopsy Samples for Single-Cell RNA Sequencing[J]. Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 2023, 175(4): 519-523.